Определение мутации гена ALK из биоптата опухолевой ткани иммуногистохимическим методом

Молекулярно-генетическое исследование биоптата опухолевой ткани, выполняемое  иммуногистохимическим методом, для определения транслокации гена ALK. Анализ необходим для подбора таргетной терапии у больных раком легкого.
Иммуногистохимический анализ - исследование, во время которого в образцах ткани с помощью антител выявляют определенные молекулы. Метод широко применяется в онкологии.
Ген ALK (Anaplastic Lymphoma Receptor Tyrosine Kinase) локализуется на второй хромосоме, в нем «зашифрована» аминокислотная последовательность рецепторной тирозин-киназы – энзима, принадлежащего к семейству инсулиновых рецепторов¹. ALK представляет собой мембранный гликопротеин I типа, который обычно экспрессируется в нервной системе².

Молекулярный патогенез с участием ALK начинается с хромосомных перестроек, которые связывают 3''-кодирующие последовательности внутриклеточного сигнального домена ALK с 5'-промоторными элементами и кодирующими последовательностями других генов. 5'-промоторные элементы и кодирующие последовательности обеспечивают сверхэкспрессию и лиганд-независимую олигомеризацию химерных белков, что характерно для новообразований протеинтирозинкиназы слитого типа у человека. Инверсия внутри 2 хромосомы, приводящая к образованию продукта слитого гена, включающего части гена, ассоциированному с микротрубочками, тип 4 белку иглокожих (EML4) и гена ALK, была обнаружена в 2007 году в клеточных линиях немелкоклеточного рака легких и в архивных клинических образцах³. Последующая серия опубликованных исследований показали, что события инверсии EML4-ALK производят по меньшей мере 9 каталитически активных вариантов слитого белка киназы, каждый из которых содержит одинаковую часть C-концевого киназного домена ALK^4-8. Как и в случае слияний генов ALK, впервые выявленных в анапластических крупных клетках. При лимфоме (ALCL) было показано, что слитый белок EML4-ALK обладает трансформирующей активностью. В соответствии с этими данными, экспрессия EML4-ALK в альвеолярных эпителиальных клетках легких у трансгенных мышей считается мощным онкогенным фактором⁹.
Эффективность лечения злокачественных патологий связано с выявлением молекулярных механизмов формирования опухолей. Появление таргетных препаратов позволило добиться положительного результата лечения и снизить количество рецидивов онкозаболевнаий.
Биологическим материалом для исследования служит образец ткани в парафиновом блоке.
Для проведения анализа необходимо предоставить парафиновый блок со стеклопрепаратом.
Список литературы:
1. Kutok JL, Aster JC, et al. Molecular biology of anaplastic lymphoma kinase-positive anaplastic large-cell lymphoma. J Clin. Onc. 2002;20(17):3691-3702.
2. Iwahara T, et al. Molecular characterization of ALK, a receptor tyrosine kinase expressed specifically in the nervous system. Oncogene. 1997;14:439-49.
3. Soda M, et al. Identification of the transforming EML4−ALK fusion gene in non- small-cell lung cancer. Nature 2007;448(7153)561-66.
4. Inamura K, et al. EML4–ALK fusion is linked to histological characteristics in a subset of lung cancers. J Thorac Oncol. 2008;3(1):13-17.
5. Choi YL, et al. Identification of novel isoforms of the EML4-ALK transforming gene in non-small cell lung cancer. Cancer Res. 2008;68(13):4971-76.
6. Koivunen JP, et al. EML4–ALK fusion gene and efficacy of an ALK kinase inhibitor in lung cancer. Clin Cancer Res. 2008;14(13):4275-83.
7. Shinmura K, et al. EML4−ML4−ALK fusion transcripts, but no NPM-, TPM3−, CLTC−, ATIC−, or TFG-ALK fusion transcripts, in non-small cell lung carcinomas. Lung Cancer. 2008;61:163-9.
8. Takeuchi K, et al. Multiplex reverse transcription−PCR screening for EML4−ALK fusion transcripts. Clin Cancer Res. 2008;14(20):6618−24.
9. Shaw AT, et al. Clinical features and outcome of patients with non-small-cell lung cancer who harbor EML4-ALK. J Clin Oncol. 2009;27(26):4247-53.